Sağlık Sosyolojisi Deneme Sınavı Sorusu #1204975

Taq polimerazın 5’ – 3’ nükleaz aktivitesinden yararlanan prob sistemi aşağıdakilerden hangisidir? 


Dizi spesifik floresan problar

Hibridizasyon probları

Hidroliz probları

Moleküler İşaret Fenerleri

Dizi spesifik olmayan floresan boyalar


Yanıt Açıklaması:

Hidroliz probları (TaqMan): Taq polimerazın 5’ – 3’ nükleaz aktivitesinden yararlanan prob sistemidir. Mutasyon tayini, PCR amplifikasyonu sonrası iki alele özgül raportör boyanın sinyal yoğunluğunun ölçülmesiyle yapılır. Yöntemin esası, 5’ ve 3’ uçlarından florofor maddelerle işaretli prob kullanılmasına dayanır. Probun 5’ ucunda raportör florofor, 3’ ucunda ise baskılayıcı florofor bulunmaktadır. Prob – hedef DNA molekülü arasındaki hibridizasyon devam ettiği sürece raportör floroforun sinyal oluşturması, 3’ uçtaki baskılayıcı florofor tarafından engellenmektedir. Primerlerin hedef DNA’ya bağlanmasıyla başlayan primer uzaması, probun bağlandığı noktaya kadar geldiğinde, sentezin devam
edebilmesi için Taq DNA polimeraz enzimi 5’ – 3’ nükleaz aktivitesini kullanarak probu 5’ uçtan yıkmaya başlar. Böylece raportör florofor serbest hâle geçer ve sinyal oluşturur. Her döngüde meydana gelen PCR ürünü miktarına paralel olarak sinyal şiddeti de artar

Yorumlar
  • 0 Yorum