Mikroorganizmalar›n Boyas›
a) Gram-Weigert Boyas›
Tespit: %10’luk tamponlu nötral formalin.
Bloklama: 5 µm parafin kesitler.
Boyama Solüsyonunun Haz›rlanmas›:
Eozin Solüsyonu; 1.0 gr eozin Y 100.0 ml distile suda çözdürülür.
Saf Jansiyan Moru (Sterling gentian violet) Solüsyonu; 2.0 ml anilin ya¤› (aniline
oil) 88.0 ml distile su ile kar›flt›r›l›r, filtre edilir ve üzerine 5.0 gr kristal violet (gentian violet- jansiyan moru) eklenip çözündürülerek 10.0 ml %95’lik alkol eklenir ve
iyice kar›flmas› sa¤lan›r. Bu solüsyon en fazla bir ay kullan›labilir.
Gram ‹odin Solüsyonu; 300.0 ml distile suda 2.0 gr potasyum iodide çözündürüldükten sonra 1.0 gr iodine kristali kolayca ilave edilebilir (eritilebilir).
Boyama ‹fllemi:
1. Ksilol (iki kez en az 2-3 dakika), saf alkol, %95’lik alkol, %70’lik alkol serilerinden, geçirilir ve parafinden kurtar›l›r ve distile suda y›kan›r.
2. Eozin solüsyonunda 5 dakika boyan›r.
3. Suda çalkalan›r.
4. Saf jansiyan moru (sterling gentian violet) solüsyonunda 10 dakika boyan›r.
5. Gram iodin solüsyonunda y›kan›p temizlendikten sonra 3 dakika tutulur.
6. Filtre ka¤›d› ile çevredeki lekeler temizlenir.
7. Boyanma reaksiyonunu durdurmak amac›yla, eflit oranlarda kar›flt›r›lm›fl
olan anilin ya¤› ve ksilol kar›fl›m›nda dald›r›l›r.
8. Ksilolden geçirilerek fleffaflaflt›r›l›r ve kapat›l›r.
Sonuçlar:
Gram-pozitif bakteri ve mantar: Mor. ; Gram-negatif organizmler: Genellikle boya almaz.
Fibrin: Mavi-siyah.
b) Ziehl-Neelsen Boyas›
Tespit: Genel bir tespit solüsyonu.
Bloklama: 5 µm parafin kesitler.
Boyama Solüsyonunun Haz›rlanmas›:
Karbol Fuksin(carbol fuchsin) Solüsyonu; 2.5 ml fenol (%5’lik sol., Phenol - Carbolik acid-C6H5OH) eriyi¤i, 5.0 ml saf alkol, 0.5 gr bazik fuksin 50.0 ml distile su içinde kar›flt›r›larak oda ›s›s›nda saklan›r. Kullan›laca¤› zaman filtre edilerek kullan›l›r.

%1’lik Asit-alkol; 1.0 ml yo¤un hidroklorik asit ile 99.0 ml %70’lik alkol yavaflça
kar›flt›r›l›r.
Metilen Mavisi Çal›flma Solüsyonu; 0.5 gr metilen mavisi, 0.5 ml yo¤un hidroklorik
asit ve 100.0 ml musluk suyu yavafl ve dikkatlice kar›flt›r›larak eritilir.
Boyama ‹fllemi:
1. Ksilol (iki kez en az 2-3 dakika), saf alkol, %95’lik alkol, %70’lik alkol serilerinden, geçirilir ve parafinden kurtar›l›r ve distile suda y›kan›r.
2. Karbol fuksin (filtre edilmifl) solüsyonunda 10 dakika boyan›r.
3. Çeflme suyunda iyice çalkalan›r.
4. %1’lik asit-alkolde, kesitler soluk pembe oluncaya kadar, rengi aç›l›r.
5. Akarsuda 8 dakika y›kan›r.
6. Metilen mavisi çal›flma solüsyonunda 15 saniye boyan›r. (Kesitler soluk mavi olmal›d›r, afl›r› boyanmamas›na özen gösterilmelidir)
7. Önce çeflme suyunda, sonra distile suda y›kan›r.
8. %95’lik alkol, saf alkol ve ksilolden (her birinden 2’fler kez ve en az 2 dakika) geçirilerek fleffaflaflt›r›l›r ve kapat›l›r.
Sonuçlar:
Asit-fast bakteriler: Parlak k›rm›z›; Alyuvarlar (erythrocyte): Sar›ms›-turuncu. ;
Di¤er doku elemanlar›: Soluk mavi.
c) Gridley Mantar Boyas›
Tespit: Genel bir tespit solüsyonu.
Bloklama: 5 µm parafin kesitler.
Boyama Solüsyonunun Haz›rlanmas›:
Kromik Asit Solüsyonu; 4.0 gr kromik asit 100.0 ml distile su ile kar›flt›r›l›r.
Schiff Ay›rac›; Kaynamakta olan 200.0 ml distile su içine alev almamas›na dikkat
ederek 1.0 gr basik fuksin ilave edilir. Fuksin iyice çözündükten sonra so¤utulur
ve filtre edilir. Üzerine 2.0 gr sodium metabisulfite (Na2S2O2) ve 10 ml normal hidroklorik asit (1/N HCl) yavaflça ilave edilir. 24 saat içinde rengi aç›ld›ktan sonra
üzerine 0.5 gr aktif karbon (Norit) ilave edilir, bir dakika çalkalan›r ve filtre edilir.
Elde edilen filtrat renksizdir ve buzdolab›nda saklanmal›d›r.
Sulfüroz (sulfurous) Solüsyonu; 6.0 ml %10’luk sodium metabisulfite (Na2S2O2)(10
gr Na2S2O2 / 100.0 ml distile su) 100.0 ml distile su ile kar›flt›r›l›p üzerine 5.0 ml
normal hidroklorik asit (1/N HCl) yavaflça ilave edilir.
Aldehid Fuksin Solüsyonu; 1.0 gr basik fuksin 200.0 ml %70’lik alkolde eritilerek
üzerine 2.0 ml paraldehit ve 2.0 ml yo¤un hidroklorik asit dikkatlice ilave edilir.
Bu solüsyon 3 gün oda ›s›s›nda bekletilerek renginin koyu maviye dönmesi beklenir. Buzdolab›nda saklan›r. Kullan›laca¤› zaman oda ›s›s›na getirilip filtre edilir ve
kullan›l›r.
Metanil Sar› Solüsyonu; 0.25 gr metanil sar› 100.0 ml distile suda eritilip üzerine 2
damla glasial asetik asit ilave edilir.
Boyama ‹fllemi:
1. Ksilol (iki kez en az 2-3 dakika), saf alkol, %95’lik alkol, %70’lik alkol serilerinden, geçirilir ve parafinden kurtar›l›r ve distile suda y›kan›r.
2. %4’lük kromik asit solüsyonunda 1 saat tutulur.
3. Akarsuda 5 dakika y›kan›r.
4. Schiff ay›rac›nda 15 dakika tutulur.
5. Sulfüroz asit solüsyonunda her biri 1.5 dakika olmak üzere 3 kez çalkalan›r.
6. Akarsuda 15 dakika y›kan›r.