TIBBİ CİHAZ VE MALZEMELER Dersi İleri Moleküler Tanı, Tektik Cihaz ve Malzemeleri soru detayı:

CEVAP:

Yöntemin uygulanmasında ilk olarak özgün ve farklı DNA hibridizasyon hedeflerini içeren yüksek yoğunluktaki noktalama işlemi bir mikrodizilim hâlinde cam bir destek üzerine yapılır. Ardından her deney için floresan işaretli cDNA işaretleyicileri hazırlanır: Bu işlem iki ayrı hedef hücre toplumunun mRNA’sının eldesi ile başlar. Farklı floresan boyalar kullanarak her mRNA örneğinin ayrı ayrı ters yazılımları gerçekleştirilir. İki farklı işaretleyici birleştirilerek ayrı ayrı cDNA hedefleri ile hibridize edilir. Sonra bir lazer tarayıcısı kullanılarak ortaya çıkan floresan ışımalar tespit edilir. Eğer iki örnekten birinde herhangi bir genin mRNA düzeyi yüksekse daha fazla cDNA söz konusu genle etkileşime girer ve o örneğin işaretlenmesinde kullanılan floresan boya daha fazla ışıma verir. Belirli bir noktada iki işaretli örneğin floresan yoğunluklarının oranı tarayıcı ile belirlenir. Ortaya çıkan sonuç bir veri tabanına aktarılarak incelenir.