TEMEL VETERİNER MİKROBİYOLOJİ VE İMMÜNOLOJİ Dersi BAKTERİYEL GENETİK VE GENETİK TABANLI TESTLER soru detayı:

PAYLAŞ:

SORU: PCR işlemi nasıl uyulanır?


CEVAP: PCR işlemi için işlemi başlatacak, aranan hedef DNA’nın her bir sarmalının bir ucuna spesifik olarak tasarlanmış ve sentezlenmiş bir çift başlatıcı DNA parçacığına gerek vardır. Başlatıcı bu moleküllere primer denir. Primerler DNA polimeraz enziminin de PCR içeriğine katılmasıyla uygun olduğu nükleotid dizilerine bağlanarak uzar. Böylece hedefin her sarmalından bir başka kopya sarmal sentezlenir ve sonuçta her bir DNA molekülü iki katına çıkmış olur. Bu işlem çok kez tekrarlanarak milyonlarca kopya hedef DNA oluşturulur. PCR sonu elde edilen PCR ürünlerine amplikon denir. PCR reaksiyonu içinde temel olarak bulunan materyaller şunlardır: hedef DNA, primerler, sıcaklığa dayanıklı DNA polimeraz enzimi, nükleotid bazları (Adenin, Timini Guanin, Sitozin), Su ve Magnezyum. ‹çine bu maddelerin konulduğu tüpler veya kapiller borucuklar PCR makinelerine yerleştirilir ve makinelerin PCR koşulları ayarlanır. Tipik bir PCR için uygulanan sıcaklık koşulları ve adları şunlardır. Önce 9495C’de 15 sn-1dk denatürasyon, 52-60 C’ler arası 15 sn- 2 dk arası primerlerin hibridizasyonu ve 72 C’de 15 sn- 3 dk arası DNA polimeraz enziminin primerleri uzatması. Bu 3 aşamadan oluşan bir PCR döngüsü yaklaşık 25 ile 40 kez tüplere uygulanır ve PCR işlemi bitirilir.